HEPENGBIO 食物總抗氧化能力（TAC）熒光法（ORAC）定量檢測試劑盒

產(chǎn)品說明書

 
主要用途
 
HEPENGBIO 食物總抗氧化能力（TAC）熒光法（ORAC）定量檢測試劑是一種旨在通過使用熒光素探針， 受到有機(jī)氮自由基 AAPH 的破壞，但在抗氧化劑的存在下，得到抑制，由此通過熒光分光光度儀，觀察其峰值下降程度的變化，來定量檢測對應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)水溶性生育酚Trolox 的總抗氧化能力，即消除自由基等值濃度的方法。適用于各種新鮮食物樣品總抗氧化能力檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡易，性能穩(wěn)定。
 

技術(shù)背景

 
超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基
（hydroxyl radical；OH-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡，甚而導(dǎo)致諸如冠心病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腫瘤、退行性病變等各種病理狀況。在生物系統(tǒng)內(nèi)，通過抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、銅藍(lán)蛋白（ceruloplasmin；CER）、鐵蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、類胡蘿卜素、抗壞血酸、還原性谷胱甘肽和尿酸膽紅素
（bilirubin）等，產(chǎn)生抗氧化能力，即捕獲自由基的能力，達(dá)到消除或降低ROS的損害。通過氧自由基吸光能力（oxygen radical absorbance capacity；ORAC），即使用熒光素（fluorescein）作為探針，2,2'-偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽（2,2-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride；AAPH）作為過氧自由基供體（peroxyl radical donor），其攻擊探針，產(chǎn)生熒光淬滅，一旦受到抗氧化劑作用，而防止熒光消失，由此評價抗氧化潛力和活性，也就是自由基去除作用（free radical scavenging），在熒光分光光度儀（激發(fā)波長485nm±20，散發(fā)波長528nm±20）的幫助下，觀察其峰值下降程度的變化，并與標(biāo)準(zhǔn)化抗氧化劑水溶性生育酚Trolox對照。
 

產(chǎn)品內(nèi)容

 
HEPENGBIO 清理液（Reagent A） 500 毫升
HEPENGBIO 緩沖液（Reagent B） 4 毫升
HEPENGBIO 染色液（Reagent C） 7.5 毫升
HEPENGBIO 氧化液（Reagent D） 1 管
HEPENGBIO 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E） 200微升
產(chǎn)品說明書   1 份
 

保存方式

保存 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）和 HEPENGBIO 緩沖液（Reagent B）在 4℃冰箱里，其余的保存在
－20℃冰箱里，避免光照；有效保證 6 月
 

用戶自備

 
50 毫升燒杯：用于樣品操作的容器
15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5 毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制的容器
4℃臺式離心機(jī)：用于樣品操作
200 微升 1 厘米光徑比色皿或黑色 96 孔板：用于熒光分析的容器熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于熒光分析
 

實驗步驟

 

一、 樣品準(zhǔn)備

 
 
1、固態(tài)食品處理
1. 秤取 1 克固態(tài)食品或粉末到 50 毫升燒杯，杯口封口膜密封
2. 加入 8 毫升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）
3. 攪拌 30 分鐘，充分混勻
4. 繼續(xù)加入 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）到終容量為 10 毫升
5. 過濾紙過濾，去除不溶性固體顆粒
6. 封口膜封口備用
 

2、液態(tài)食品處理

1. 移取 5 毫升待測液態(tài)食品到 15 毫升錐形離心管
2. 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 1500g
3. 移取上清液到新的 15 毫升錐形離心管
4. （選擇步驟）可以加入適量的 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）
5. （選擇步驟）過濾紙過濾（如果離心處理，樣品仍然不清澈）
6. 置于冰槽里備用或放進(jìn)-20 冰箱里保存二、標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)備
1. 準(zhǔn)備好 5 個 1.5 毫升離心管，標(biāo)記為 1 至 5 號管
2. 分別加入 50 微升 HEPENGBIO 緩沖液（Reagent B）到 2 至 5 號管
3. 移取 100 微升 HEPENGBIO 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到 1 號管，混勻
4. 小心移取 50 微升 1 號管的 HEPENGBIO 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到 2 號管，混勻
5. 小心移取 50 微升 2 號管稀釋的 HEPENGBIO 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到 3 號管，混勻
6. 小心移取 50微升 3 號管稀釋的 HEPENGBIO 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到 4 號管，混勻
7. 將 1 至 5 號管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表
 

管號

HEPENGBIO 緩沖液（Reagent B）

HEPENGBIO 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）

測定體系 標(biāo)準(zhǔn) Trolox 濃度