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膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結(jié)合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動物組織中，主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝以及激素合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構(gòu)體的多烯抗生素（polyene antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于S. FILIPINENSIS細(xì)菌的培養(yǎng)液中。其分子式為C35H58O11，分子量為654.8。首先在膽固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化膽固醇（cholesterel ester）轉(zhuǎn)化為游離膽固醇，然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結(jié)合形成聚集體或復(fù)合物，產(chǎn)生熒光。
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固著液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO水解液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO抗干擾液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent E） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO水解液（Reagent C）和HEPENGBIO染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月
用戶自備
熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一、 樣本固著處理
1． 準(zhǔn)備1個(gè)48孔細(xì)胞培養(yǎng)板的細(xì)胞或載波片的細(xì)胞
2． 小心抽去48孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
3． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
4． 小心移去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
5． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟3至4二次
6． 小心加入xx微升HEPENGBIO固著液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面
7． 室溫下孵育30分鐘
8． 小心移去HEPENGBIO固著液（Reagent B）
9． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
10． 小心移去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
11． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至10二次
二、樣本染色處理
1． 小心加入xx微升HEPENGBIO水解液（Reagent C），鋪滿整個(gè)樣品表面
2． 室溫下孵育1小時(shí)（注意：可以延長至4小時(shí)，避免干枯）
3． 小心移去HEPENGBIO水解液（Reagent C）
4． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
5． 小心移去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
6． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至5一次
7． 小心加入xx微升HEPENGBIO抗干擾液（Reagent D），鋪滿整個(gè)樣品表面
8． 室溫下孵育10分鐘
9． 小心移去HEPENGBIO抗干擾液（Reagent D）
10． 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent E），鋪滿整個(gè)樣品表面
11． 室溫下孵育30分鐘，避免光照
12． 小心移去HEPENGBIO染色液（Reagent E）
13． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
14． 小心移去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
15． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14二次
16． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）
17． 即刻在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長：340nm；散發(fā)波長：430nm――膽固醇陽性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為20次（48孔細(xì)胞培養(yǎng)板）操作
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 操作時(shí)，避免污染母液
4． 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
5． 樣品染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察
6． 熒光容易受到光漂白（photobleach），建議使用HEPENGBIO抗淬滅劑Ⅰ－12058.2
7． 本產(chǎn)品使用載玻片細(xì)胞染色后，可用于電鏡分析
8． 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整處理液：
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固著液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO水解液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO抗干擾液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent E） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO水解液（Reagent C）和HEPENGBIO染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月
用戶自備
熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一、 樣本固著處理
1． 準(zhǔn)備1個(gè)48孔細(xì)胞培養(yǎng)板的細(xì)胞或載波片的細(xì)胞
2． 小心抽去48孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
3． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
4． 小心移去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
5． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟3至4二次
6． 小心加入xx微升HEPENGBIO固著液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面
7． 室溫下孵育30分鐘
8． 小心移去HEPENGBIO固著液（Reagent B）
9． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
10． 小心移去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
11． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至10二次
二、樣本染色處理
1． 小心加入xx微升HEPENGBIO水解液（Reagent C），鋪滿整個(gè)樣品表面
2． 室溫下孵育1小時(shí)（注意：可以延長至4小時(shí)，避免干枯）
3． 小心移去HEPENGBIO水解液（Reagent C）
4． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
5． 小心移去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
6． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至5一次
7． 小心加入xx微升HEPENGBIO抗干擾液（Reagent D），鋪滿整個(gè)樣品表面
8． 室溫下孵育10分鐘
9． 小心移去HEPENGBIO抗干擾液（Reagent D）
10． 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent E），鋪滿整個(gè)樣品表面
11． 室溫下孵育30分鐘，避免光照
12． 小心移去HEPENGBIO染色液（Reagent E）
13． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
14． 小心移去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
15． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14二次
16． 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）
17． 即刻在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長：340nm；散發(fā)波長：430nm――膽固醇陽性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為20次（48孔細(xì)胞培養(yǎng)板）操作
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 操作時(shí)，避免污染母液
4． 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
5． 樣品染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察
6． 熒光容易受到光漂白（photobleach），建議使用HEPENGBIO抗淬滅劑Ⅰ－12058.2
7． 本產(chǎn)品使用載玻片細(xì)胞染色后，可用于電鏡分析
8． 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整處理液：
| 操作容器 | 建議處理液規(guī)格 |
| 載玻片 | 100微升 |
| 載玻片培養(yǎng)皿 | 1毫升 |
| 35mm培養(yǎng)皿 | 1毫升 |
| 96孔培養(yǎng)板 | 100微升 |
| 48孔培養(yǎng)板 | 200微升 |
| 24孔培養(yǎng)板 | 500微升 |
| 12孔培養(yǎng)板 | 1毫升 |
| 6孔培養(yǎng)板 | 2毫升 |
| 25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 3毫升 |
