鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì)，占1150克。其中99％的鈣以氟磷灰石鈣（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細(xì)胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式：一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣，其構(gòu)成約40％至50％的血清中的總鈣含量；另一種為彌散型游離鈣，其進(jìn)一步分成具有活性的復(fù)合鈣（complexed calcium）和離子鈣（ionized calcium）。鈣對(duì)神經(jīng)肌肉興奮性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運(yùn)輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。鈣的檢測(cè)包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等，但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。甲基百里酚藍(lán)（methylthymol blue；MTB）比色法是一種穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、直接的鈣檢測(cè)。鈣與甲基百里酚藍(lán)，在堿性條件下反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物，在分光光度儀下通過(guò)吸光峰值的變化（波長(zhǎng)612nm），來(lái)定量測(cè)定鈣的總濃度。其反應(yīng)系統(tǒng)為：
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）     毫升
HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent B）     毫升
HEPENGBIO陰性液（Reagent C）     毫升
HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）     微升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)     1份
 
保存方式
 
保存在4℃冰箱里，避免光照，有效保證6月
 
用戶(hù)自備
 
1.5毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品操作的容器
5毫升玻璃管：用于尿液樣品制備的容器
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品制備
培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育
比色皿：用于反應(yīng)的容器
分光光度儀：用于比色分析
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
一、 樣品準(zhǔn)備
 
選擇一：血清樣品
1． 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管 
2． 抽取1毫升血液，置于儲(chǔ)存管里
3． 室溫下，靜置30分鐘，直至血液凝結(jié)（注意：血液凝集后，不宜久置）
4． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
6． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存
 
選擇二：尿液樣品 
1． 準(zhǔn)備好5毫升玻璃管
2． 移取1毫升液體到玻璃管 
3． 調(diào)節(jié)pH到3至4（注意：使用0.1摩爾鹽酸調(diào)節(jié)）
4． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上清液到新的5毫升玻璃管 
6． 加入2倍容量的用戶(hù)自備的無(wú)離子水
7． 即刻置于冰槽里備用 
 
二、 測(cè)定準(zhǔn)備
 
1． 準(zhǔn)備好上述制備的待測(cè)樣品，置于冰槽里備用
2． 設(shè)定好分光光度儀：波長(zhǎng)612nm，并置零 
3． 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管
4． 分別加入xx微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）到2至5號(hào)管
5． 移取xx微升HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到1號(hào)管，混勻
6． 小心移取xx微升1號(hào)管的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到2號(hào)管，混勻
7． 小心移取xx微升2號(hào)管稀釋的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到3號(hào)管，混勻
8． 小心移取xx微升3號(hào)管稀釋的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到4號(hào)管，混勻
9． 將1至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表
 

管號(hào)	HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）	HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）	標(biāo)準(zhǔn)鈣濃度
1	--	xx微升	x毫摩爾/升
2	xx微升	xx微升1號(hào)管	xx毫摩爾/升
3	xx微升	xx微升2號(hào)管	xx毫摩爾/升
4	xx微升	xx微升3號(hào)管	xx毫摩爾/升
5	xx微升	0	0

 
 
三、（選擇步驟）背景對(duì)照測(cè)定
 
1． 移取xx微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent B）
3． 加入xx微升HEPENGBIO陰性液（Reagent C）  
4． 上下傾倒數(shù)次，混勻
5． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里孵育5分鐘，避免光照
6． 即刻放進(jìn)分光光度儀（612nm波長(zhǎng)）檢測(cè)：獲得吸光讀數(shù)（OD）
 
四、 標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品測(cè)定
 
1． 移取xx微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent B）
3． 加入20微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液或待測(cè)樣品 
4． 上下傾倒數(shù)次，混勻
5． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里孵育5分鐘，避免光照
6． 即刻放進(jìn)分光光度儀（612nm波長(zhǎng)）檢測(cè)：獲得吸光讀數(shù)（OD）
7． 實(shí)際吸光讀數(shù)：標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品吸光讀數(shù)－背景對(duì)照吸光讀數(shù)
8． 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為實(shí)際吸光讀數(shù)（OD）；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)鈣濃度（毫摩爾/升）
9． 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)鈣濃度
10． 計(jì)算樣品實(shí)際鈣濃度（注意：計(jì)算時(shí)，不要遺忘稀釋倍數(shù)；例如尿液樣品需要乘上3）
 
【根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)鈣濃度（毫摩爾/升）X 樣品稀釋倍數(shù)】＝毫摩爾/升
 
注意事項(xiàng)
 
1． 本產(chǎn)品為50次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)液
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 檢測(cè)過(guò)程中，尤其在標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定過(guò)程中，先將所需的HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）和HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent B）全部混合后，再移取1毫升工作液進(jìn)行測(cè)定操作，避免操作誤差
4． 避免使用EDTA、溴磺酚酞（bromosulfophthalein）、膽紅素（Bilirubin）、對(duì)乙酰氨基（acetaminophen）、肼屈嗪（Hydralazine）等，否則干擾檢測(cè)
5． 建議使用空腹后采集的無(wú)溶血現(xiàn)象的血清樣品
6． 陳舊血清，尤其出現(xiàn)沉淀的血清，不宜使用
7． 血清鈣在室溫下，24小時(shí)內(nèi)成分穩(wěn)定；4℃條件下，可維持1周；－20℃條件下，可維持5月
8． 系統(tǒng)操作過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)定只需1次
9． 孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行比色測(cè)定
10． 比色測(cè)定后，比色皿須清洗徹底
11． 如果用戶(hù)沒(méi)有匹配的濾波器，可以使用600nm至650nm之間的任一波長(zhǎng)
12． 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低，可以調(diào)整樣品濃度
13． 檢測(cè)敏感度在5微摩爾至4毫摩爾鈣濃度范圍
14． 正常血鈣和尿鈣濃度：小于4周新生兒：7.2至11.2毫克/分升；2月至12月嬰兒：8.4至10.8毫克/分升；大于1歲：8.4至10.4毫克/分升；成人：8.6至10.2毫克/分升；尿鈣24小時(shí)總量100至320毫克
15． 換算：1毫摩爾/升 X  4.01 ＝ 毫克/分升；1毫克/分升＝250微摩爾/升
本公司提供系列鈣生化檢測(cè)試劑產(chǎn)品