甘薯長(zhǎng)喙殼菌（Ceratocystis fimbriata），是一種分布廣泛、危害多種木本和草本植物的真菌病原體，為深棕綠色，其最初在甘薯上發(fā)現(xiàn)。甘薯長(zhǎng)喙殼菌屬于囊菌亞門（aseomycotina）、核菌綱（pyrenomycetes）、小囊菌目（microascales）、長(zhǎng)喙殼科（ceratocystiaceae）。其主要寄宿包括甘薯、可可、咖啡、橡膠、芒果、桉樹、楊樹、刺桐、山胡桃、楓樹、石榴、刺槐、柑橘類、李屬植物等草本植物，以及木薯、芋頭、山扁頭、菽麻等草本植物。甘薯長(zhǎng)喙殼菌具有復(fù)雜的多種屬，宿主和地域分布特殊性。甘薯長(zhǎng)喙殼菌通過(guò)昆蟲、水源、土壤等傳播并感染創(chuàng)傷的植物，導(dǎo)致脈管或木質(zhì)深棕紅色至黑色色斑、潰爛（kanker）、創(chuàng)傷蔓延、樹葉凋謝（wilting）等病理癥狀。基于核糖體DNA（ribosomal DNA；rDNA）上內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（Internal Transcribed Spacer；ITS）的變異區(qū)（variable region）在甘薯長(zhǎng)喙殼菌中高度保留，以此作為甘薯長(zhǎng)喙殼菌的分子標(biāo)記。通過(guò)引物設(shè)計(jì)，擴(kuò)增產(chǎn)物，在凝膠電泳上呈現(xiàn)特異性條帶，或進(jìn)一步測(cè)序，數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)照，確定甘薯長(zhǎng)喙殼菌種系（species）。  
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO擴(kuò)增液（Reagent A） 600微升
HEPENGBIO引物液（Reagent B）  40微升
HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C）   1毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書   1份
 
保存方式
 
保存在－20℃冰箱里；有效保證6月
 
用戶自備
 
PCR級(jí)礦物油：用于封隔反應(yīng)液
PCR儀：用于樣品擴(kuò)增
PCR管或平板：用于PCR反應(yīng)的容器
瓊脂糖凝膠電泳：用于擴(kuò)增后電泳分析
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
實(shí)驗(yàn)開始前，從－20℃冰箱中取出試劑，放進(jìn)冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作：
 
1． 針對(duì)一個(gè)樣本，每次移出30微升HEPENGBIO擴(kuò)增液（Reagent A）到PCR管
2． 加入2微升用戶自備的的待測(cè)DNA樣品（總量100納克）
3． 加入2微升HEPENGBIO引物液（Reagent B）
4． 再加入16微升HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C）（反應(yīng)總量為50微升）
5． 即刻放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)瞬時(shí)離心5秒
6． （選擇步驟）加入50微升用戶自備的PCR級(jí)礦物油（注意：參見注意事項(xiàng)12）
7． 即刻進(jìn)行熱啟動(dòng)PCR反應(yīng)：
 

溫度（℃）	時(shí)間	循環(huán)
95	2分鐘	1
95 66 72	30秒鐘 1分鐘 30秒鐘	38
72	10分鐘	1

 
8． 反應(yīng)完畢后，移取5微升進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳：產(chǎn)物為181bp