體外生育（in vitro production；IVP）包括三大步驟：卵母細(xì)胞體外成熟（in vitro maturation）、體外受精（in vitro fertilization；IVF）和體外培養(yǎng)（in vitro culture；IVC）。運(yùn)用體外系統(tǒng)產(chǎn)生胚胎，可以解決不育的問(wèn)題。而動(dòng)物胚胎的產(chǎn)生，可以提供胚胎干細(xì)胞、器官移植等。其中兔是許多生物醫(yī)學(xué)研究的重要模式動(dòng)物。確保胚胎的發(fā)育和質(zhì)量，卵母細(xì)胞的體外成熟是最基礎(chǔ)的步驟。發(fā)育能力的降低主要在于卵母細(xì)胞的不完全成熟和多精子穿透性（polyspermic penetration）過(guò)高。因此使用化學(xué)性精制培養(yǎng)液，可以避免使用成分不明確和不穩(wěn)定的血清和卵泡液（follicle fluid；FF）。  
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)          1份
 
保存方式
 
保存在－20℃的冰箱里，有效保證6月
 
用戶(hù)自備
 
35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿：用于樣品操作的容器
4℃微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于卵母細(xì)胞培養(yǎng)
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A）從－20℃的冰箱里取出，置于37℃培養(yǎng)箱里均衡溫度2小時(shí)。然后進(jìn)行下列操作。
 
1． 準(zhǔn)備好新鮮切除的動(dòng)物卵巢組織
2． 在30分鐘內(nèi)，從卵泡中吸出卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體（cumulus oocyte complexes；COC）
3． 使用卵母細(xì)胞清理液清洗3次（注意：建議使用HEPENGBIO卵母細(xì)胞清理液－HEPENGBIO14009.3）
4． 滴入xx微升HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A）到35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中預(yù)熱的礦物液（mineral oil）中
5． 轉(zhuǎn)移4至6個(gè)COC到培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液里
6． 放進(jìn)5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育12小時(shí)，溫度37℃，濕度飽和
7． （選擇步驟）評(píng)價(jià)卵丘擴(kuò)展（cumulus expansion）和細(xì)胞成熟狀況（注意：建議使用HEPENGBIO卵母細(xì)胞核成熟苔紅素（orcein）熒光染色分析試劑盒－HEPENGBIO14025）
8． （選擇步驟）移取COC，分離卵母細(xì)胞
9． （選擇步驟）繼續(xù)后續(xù)體外受精
10． 期待結(jié)果參考：
 

	時(shí)間	卵母細(xì)胞百分率（%）
Germinal Vesicle	0至5小時(shí)	100
Metaphase I	6小時(shí)	70
Anaphase I－Telophase I	8小時(shí)	70
Metaphase II	10至12小時(shí)	80
Penetration	1天	80
Male Pronuleus Formation		60
Cleavage		86
Blastocyst	7天