腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化是經(jīng)過(guò)一系列遺傳和表觀遺傳的異常改變而產(chǎn)生的一組細(xì)胞群，其獨(dú)立于正常細(xì)胞限制的外在和內(nèi)在信號(hào)而不斷繁殖。腫瘤細(xì)胞的分離和特征分析在于理解腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和轉(zhuǎn)移機(jī)制，以及生物標(biāo)記的發(fā)現(xiàn)。
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）   毫升
HEPENGBIO酶解液（Reagent B）   毫升
HEPENGBIO中和液（Reagent C）   毫升
HEPENGBIO溶血液（Reagent D）   毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)   1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO酶解液（Reagent B）和HEPENGBIO中和液（Reagent C）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月
 
用戶自備
 
腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液：用于純化的腫瘤細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)
2升三角燒瓶：用于盛放麻醉動(dòng)物的容器
乙醚：用于麻醉動(dòng)物
手術(shù)器械：用于解剖動(dòng)物
恒溫水浴搖床：用于孵育反應(yīng)
15毫升錐形離心管：用于細(xì)胞制備的容器
50毫升錐形離心管：用于細(xì)胞制備的容器
10毫升移液管：用于破碎組織
40微米無(wú)菌尼龍網(wǎng)：用于分離細(xì)胞
25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶或35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿或6孔細(xì)胞培養(yǎng)板：用于原代細(xì)胞培養(yǎng)的容器
4℃臺(tái)式離心機(jī)：用于沉淀細(xì)胞
光學(xué)顯微鏡：用于觀察細(xì)胞形態(tài)
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑置于冰槽里凍融，同時(shí)將用戶自備的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液置于37℃恒溫水槽預(yù)熱。然后進(jìn)行下列操作。
 
1． 準(zhǔn)備1個(gè)2升三角燒瓶
2． 放入300至500克左右的大鼠
3． 注入2毫升乙醚，蓋上 
4． 觀察大鼠，直至其四肢癱軟、背部肌肉松馳
5． 取出大鼠，局部消毒
6． 手術(shù)取出腫瘤組織（注意：盡量去除附著在腫瘤組織上的正常組織）
7． 放進(jìn)50毫升錐形離心管（注意：新鮮腫瘤組織在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行后續(xù)操作）
8． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗一次
9． 即刻用刀片輕柔切碎組織（1至2毫米大?。?br> 10． 放進(jìn)15毫升錐形離心管
11． 加入xx毫升HEPENGBIO酶解液（Reagent B）
12． 放進(jìn)37℃恒溫?fù)u床孵育4小時(shí)
13． 使用10毫升移液管快速抽吸5次（注意：避免氣泡）
14． 室溫下靜置5分鐘
15． 加入xx毫升HEPENGBIO中和液（Reagent C），混勻
16． 小心移取上清液（不含組織顆粒）或使用40微米無(wú)菌尼龍網(wǎng)過(guò)濾到新的15毫升錐形離心管
17． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
18． 小心抽去上清液
19． 加入xx毫升HEPENGBIO中和液（Reagent C）
20． 混勻細(xì)胞顆粒群
21． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
22． 小心抽去上清液
23． （選擇步驟）加入xx毫升HEPENGBIO溶血液（Reagent D），混勻細(xì)胞顆粒群
24． （選擇步驟）室溫下孵育3分鐘
25． （選擇步驟）放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
26． （選擇步驟）小心抽去上清液
27． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）
28． 混勻細(xì)胞顆粒群
29． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
30． 小心抽去上清液
31． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟27至30一次
32． 加入5毫升37℃預(yù)熱的用戶自備的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
33． 轉(zhuǎn)移到25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶或35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿或6孔細(xì)胞培養(yǎng)板的1孔
34． 放進(jìn)37℃二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24至48小時(shí)或直至細(xì)胞貼壁
35． 更換一半培養(yǎng)液（注意：如果6小時(shí)已經(jīng)貼壁，就可以更換一半培養(yǎng)液）
36． 以后，每間隔5天更換一半培養(yǎng)液一次，直至細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿平面（注意：避免培養(yǎng)液顏色呈現(xiàn)黃色）
37． 光學(xué)顯微鏡觀察