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陽離子熒光羰花青染色劑JC-1（5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一種對膜電位高度敏感的染色劑。它特異性地進(jìn)入線粒體，分布和結(jié)合在線粒體基質(zhì)上。線粒體膜電位的高低變化決定了JC-1的分布濃度。電位高，JC-1形成聚集體，而濃度高，熒光顯色為紅色或桔紅色；反之， 則為綠色。熒光減弱表明線粒體內(nèi)膜功能受到損害。
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO 染色液（Reagent A） 微升
HEPENGBIO 稀釋液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO 清理液（Reagent C） 毫升
產(chǎn)品說明書 1 份
保存方式
保存 HEPENGBIO 清理液（Reagent C）在 4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；HEPENGBIO 染色液
（Reagent A）避免光照；有效保證 6 月
用戶自備
1.5 毫升離心管：用于工作液配制的容器培養(yǎng)箱：用于染色孵育
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于冰凍切片組織細(xì)胞線粒體熒光定性分析
實驗步驟
實驗開始前， 將－ 20℃冰箱里的試劑盒中的 HEPENGBIO 染色液（ Reagent A） 置入冰槽里融化， HEPENGBIO 稀釋液（Reagent B）放進(jìn) 37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出 xx 微升 HEPENGBIO 染色液
（Reagent A）到新的 1.5 毫升離心管，加入 xx 微升 HEPENGBIO 稀釋液（Reagent B），混勻后，在冰槽
里靜置，并標(biāo)記為 HEPENGBIO 染色工作液，放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1. 準(zhǔn)備 5 片待測的厚為 10 微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片
2. 置于室溫下，小心加上 xx 微升預(yù)冷的 HEPENGBIO 清理液（Reagent C），鋪滿整個切片表面
3. 小心移去切片上的 HEPENGBIO 清理液（Reagent C）
4. 小心加上 xx 微升室溫預(yù)熱的 HEPENGBIO 染色工作液，鋪滿整個切片表面
5. 在 37℃濕潤培養(yǎng)箱里，孵育 20 分鐘（注意：避免液體蒸發(fā)）
6. 小心移去切片上的 HEPENGBIO 染色工作液，避免光照
7. 小心加上 xx 微升 HEPENGBIO 清理液（Reagent C），鋪滿整個切片表面
8. 小心移去切片上的 HEPENGBIO 清理液（Reagent C）
9. 放上蓋玻片或封片（注意：檢測前置于冰槽里）
10. 即刻在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察（單濾波或雙濾波）：
觀察紅色熒光：濾波器激發(fā)波長 490nm，散發(fā)波長 590nm 或羅丹明（rhodamine）濾波器激發(fā)波長 540nm， 散發(fā)波長 570nm 或德州紅（Texas Red）濾波器激發(fā)波長 590nm，散發(fā)波長 610nm――可見
亮紅色熒光；如果強(qiáng)度顯著減弱，表明線粒體膜電位受到破壞
觀察綠色熒光：濾波器激發(fā)波長 490nm，散發(fā)波長 530nm 或熒光素（Fluorescein）濾波器激發(fā)波長 490nm， 散發(fā)波長 520nm――如果綠色熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，表明線粒體膜電位受到破壞，未結(jié)合 JC
－1 染料在細(xì)胞漿里
