脂滴（lipid droplet）是細胞中由中性脂質(zhì)（甘油三酯、膽固醇酯）和少量蛋白為核心，外包一層磷脂和膽固醇構(gòu)成的帶有蛋白的膜?？梢娪诖蠖鄶?shù)培養(yǎng)細胞中。在脂肪細胞中，脂滴存儲大量甘油三酯，作為能量之源，而在其它細胞中，用于膽固醇內(nèi)平衡的維持。脂滴具有幫助膜合成和修復(fù)，固醇類激素合成，以及提供脂類代謝酶的底物等功能。通過差速和等密度離心處理，獲得脂滴細胞器，用于后續(xù)脂質(zhì)定量和蛋白分離等。  
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）   毫升
HEPENGBIO低滲液（Reagent B）      毫升
HEPENGBIO分離液A（Reagent C）   毫升
HEPENGBIO分離液B（Reagent D）   毫升
產(chǎn)品說明書   1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO低滲液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月
 
用戶自備
 
HANK平衡鹽緩沖溶液（HEPENGBIO12028）或PBS緩沖溶液（HEPENGBIO12033）：用于清理細胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于細胞脫離
完全細胞培養(yǎng)液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的細胞培養(yǎng)基
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
臺式離心機：用于樣品操作
超速離心機：用于樣品操作
DOUNCE勻漿器：用于裂解細胞
渦旋震蕩儀：用于混勻
 
實驗步驟
 
實驗開始前，將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進行下列操作。
 
1． 準備5至10瓶75cm²細胞培養(yǎng)瓶的細胞（5 X 10⁷），直至細胞生長鋪滿整個培養(yǎng)表面
2． 分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個細胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面，然后抽去
3． 重復(fù)實驗步驟2一次
4． 加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養(yǎng)平面
5． 置入37℃培養(yǎng)箱3分種
6． 輕輕手擊震動培養(yǎng)瓶，使細胞脫落
7． 分別加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液
8． 移入一個50毫升錐形離心管
9． 放入臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升預(yù)冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細胞
12． 放入臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
13． 小心抽去上清液
14． 加入預(yù)冷的xx毫升HEPENGBIO低滲液（Reagent B）
15． 渦旋震蕩5秒，充分混勻
16． 冰上孵育10分鐘
17． 即刻放進預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
18． 置于冰槽里用勻漿棒勻化細胞（約40下）
19． 將所有細胞勻漿物移入15毫升錐形離心管 
20． 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
21． 小心移出1毫升白色懸浮脂質(zhì)層到新的15毫升錐形離心管
22． 放進－70℃冰箱里備用或放進冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
23． 加入預(yù)冷的xx微升HEPENGBIO分離液A（Reagent C），混勻（注意：將脂質(zhì)團均勻混勻）
24． 轉(zhuǎn)移到13毫升超速離心管
25． 小心沿著管壁，在樣品上面，一滴一滴加入xx毫升HEPENGBIO分離液B（Reagent D）（注意：避免晃動）
26． 小心沿著管壁，一滴一滴加入xx毫升HEPENGBIO低滲液（Reagent B）在HEPENGBIO分離液B（Reagent D）上面，直至加滿離心管（注意：避免晃動）
27． 小心放進4℃超速離心機離心30分鐘，速度為28000g 
28． 小心取出離心管 
29． 小心抽取懸浮不透明的白色脂質(zhì)層到新的15毫升離心管 
30． 加入適量預(yù)冷的HEPENGBIO低滲液（Reagent B），混勻
31． 放進－70℃冰箱里保存或置于冰槽里準備后續(xù)操作（脂質(zhì)定量、脂滴蛋白萃取等）