膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結(jié)合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動(dòng)物組織中，主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝以及激素合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構(gòu)體的多烯抗生素（polyene antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于S. FILIPINENSIS細(xì)菌的培養(yǎng)液中。其分子式為C35H58O11，分子量為654.8。菲律賓與膽固醇結(jié)合形成聚集體或復(fù)合物。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過(guò)程中，有機(jī)溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以最大程度保護(hù)組織中的膽固醇成分是菲律賓染色的關(guān)鍵。
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPNGBIO脫蠟液（Reagent A）          50毫升
HEPNGBIO凈化液（Reagent B）   10毫升
HEPNGBIO清理液（Reagent C）   50毫升
HEPNGBIO抗干擾液（Reagent D）        10毫升
HEPNGBIO染色液（Reagent E）    5毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書    1份
 
保存方式
 
保存HEPNGBIO染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月
 
用戶自備
 
熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析
 
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
一、 脫蠟處理
 
1． 取出待測(cè)的6微米厚的石蠟包埋的組織切片
2． 小心加上500微升HEPNGBIO脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面（注意：使用前，搖勻脫蠟液）
3． 放進(jìn)70℃恒溫培養(yǎng)箱里孵育5分鐘
4． 即刻小心移去切片上的HEPNGBIO脫蠟液（Reagent A）
5． （選擇步驟）重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2至4一次
6． 小心加上200微升HEPNGBIO凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
7． 室溫下孵育2分鐘
8． 小心移去切片上的HEPNGBIO凈化液（Reagent B）
9． 進(jìn)一步依次常規(guī)凈化處理：用戶自備的100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇
10． 小心加上200微升HEPNGBIO清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
11． 室溫下孵育3分鐘
12． 小心移去切片上的HEPNGBIO清理液（Reagent C）
三、樣本染色處理
1． 小心加上200微升HEPNGBIO抗干擾液（Reagent D），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
2． 室溫下孵育10分鐘
3． 小心移去切片上的HEPNGBIO抗干擾液（Reagent D）
4． 小心加上100微升HEPNGBIO染色液（Reagent E），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
5． 室溫下孵育30分鐘，避免光照
6． 小心移去切片上的HEPNGBIO染色液（Reagent E）
7． 小心加上200微升HEPNGBIO清理液（Reagent C），清洗樣品表面
8． 小心移去切片上的HEPNGBIO清理液（Reagent C）
9． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8二次
10． 即刻放上蓋玻片或封片
11． 在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長(zhǎng)：340nm；散發(fā)波長(zhǎng)：430nm――膽固醇陽(yáng)性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光