膜性囊泡(membrane vesicle)分成正常外向膜性囊泡(Right-side out;RSOV)和內側外翻膜性囊泡(In-side out;IOV)。正常外向膜性囊泡是通過去除細胞漿內容物,使之失去細內在的代謝系統(tǒng),同時保持質膜的原始位相,有利于提供適合的底物,不會受到降解和代謝,建立動力機制,進行轉運或攝入研究,例如微粒體組分用于V型ATP酶研究、線粒體組分用于F型ATP酶研究。而內側外翻膜性囊泡是通過裂解細胞和細胞器后,質膜重新閉合形成內側面外翻的囊泡狀結構,廣泛用于原發(fā)性轉運系統(tǒng)的研究。
產品內容
HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO平衡液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO保存液(Reagent C) 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO保存液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;有效保證6月
用戶自備
15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管:用于樣品操作和保存的容器
4℃超速離心機:用于分離膜性囊泡
DOUNCE勻漿器:用于裂解組織
實驗步驟
一、正常外向膜性囊泡分離(線粒體和微粒體)
1. 準備好新鮮的植物組織(葉片、谷粒、種子等),并秤重以確定1克組織重量
2. (選擇步驟)放進預冷的15毫升錐形離心管
3. (選擇步驟)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
4. 移入一個液氮凍存管
5. 即刻放入液氮罐過夜
6. 次日從液氮罐里取出,即刻(最快速度)碾碎組織成粉末(注意:切莫使組織凍融)
7. 放進一個15毫升錐形離心管
8. 加入xx毫升預冷的HEPENGBIO平衡液(Reagent B)
9. 渦旋震蕩5秒,充分混勻
10. 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器
11. 在冰槽里用研磨棒勻化組織(約80下)
12. 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
13. 放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1000g
14. 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管
15. 放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為10000g
16. 小心移出上清液到2個新的1.5毫升離心管,同時保留沉淀顆粒
17. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)到沉淀顆粒管――
18. 將含有上清液的2個1.5毫升離心管放進4℃超速離心機離心60分鐘,速度為100000g
19. 小心抽去上清液
20. 分別加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)――
21. 移取10微升進行蛋白質定量測定(注意:建議使用HEPENGBIO Bradford蛋白質濃度定量試劑盒-HEPENGBIO30030.1)
22. 即刻放進-70℃冰箱里保存
二、內側外翻膜性囊泡分離(質膜分離)
1. 準備好新鮮的植物組織(葉片、谷粒、種子等),并秤重以確定1克組織重量
2. (選擇步驟)放進預冷的15毫升錐形離心管
3. (選擇步驟)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
4. 移入一個液氮凍存管
5. 即刻放入液氮罐過夜
6. 次日從液氮罐里取出,即刻(最快速度)碾碎組織成粉末(注意:切莫使組織凍融)
7. 放進一個15毫升錐形離心管
8. 加入xx毫升預冷的HEPENGBIO平衡液(Reagent B)
9. 渦旋震蕩5秒,充分混勻
10. 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器
11. 在冰槽里用研磨棒勻化組織(約80下)
12. 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
13. 放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1000g
14. 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管
15. 放進4℃臺式離心機離心30分鐘,速度為10000g
16. 小心抽去上清液
17. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)――
18. 連續(xù)-70℃至37℃凍融4次――
19. 移取10微升進行蛋白質定量測定(注意:建議使用HEPENGBIO Bradford蛋白質濃度定量試劑盒
20. 即刻放進-70℃冰箱里保存
21. (選擇步驟)進行IOV組分純化(建議使用HEPENGBIO IOV膜性囊泡高質純化試劑盒
產品內容
HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO平衡液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO保存液(Reagent C) 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO保存液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;有效保證6月
用戶自備
15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管:用于樣品操作和保存的容器
4℃超速離心機:用于分離膜性囊泡
DOUNCE勻漿器:用于裂解組織
實驗步驟
一、正常外向膜性囊泡分離(線粒體和微粒體)
1. 準備好新鮮的植物組織(葉片、谷粒、種子等),并秤重以確定1克組織重量
2. (選擇步驟)放進預冷的15毫升錐形離心管
3. (選擇步驟)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
4. 移入一個液氮凍存管
5. 即刻放入液氮罐過夜
6. 次日從液氮罐里取出,即刻(最快速度)碾碎組織成粉末(注意:切莫使組織凍融)
7. 放進一個15毫升錐形離心管
8. 加入xx毫升預冷的HEPENGBIO平衡液(Reagent B)
9. 渦旋震蕩5秒,充分混勻
10. 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器
11. 在冰槽里用研磨棒勻化組織(約80下)
12. 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
13. 放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1000g
14. 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管
15. 放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為10000g
16. 小心移出上清液到2個新的1.5毫升離心管,同時保留沉淀顆粒
17. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)到沉淀顆粒管――
18. 將含有上清液的2個1.5毫升離心管放進4℃超速離心機離心60分鐘,速度為100000g
19. 小心抽去上清液
20. 分別加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)――
21. 移取10微升進行蛋白質定量測定(注意:建議使用HEPENGBIO Bradford蛋白質濃度定量試劑盒-HEPENGBIO30030.1)
22. 即刻放進-70℃冰箱里保存
二、內側外翻膜性囊泡分離(質膜分離)
1. 準備好新鮮的植物組織(葉片、谷粒、種子等),并秤重以確定1克組織重量
2. (選擇步驟)放進預冷的15毫升錐形離心管
3. (選擇步驟)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
4. 移入一個液氮凍存管
5. 即刻放入液氮罐過夜
6. 次日從液氮罐里取出,即刻(最快速度)碾碎組織成粉末(注意:切莫使組織凍融)
7. 放進一個15毫升錐形離心管
8. 加入xx毫升預冷的HEPENGBIO平衡液(Reagent B)
9. 渦旋震蕩5秒,充分混勻
10. 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器
11. 在冰槽里用研磨棒勻化組織(約80下)
12. 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
13. 放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1000g
14. 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管
15. 放進4℃臺式離心機離心30分鐘,速度為10000g
16. 小心抽去上清液
17. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)――
18. 連續(xù)-70℃至37℃凍融4次――
19. 移取10微升進行蛋白質定量測定(注意:建議使用HEPENGBIO Bradford蛋白質濃度定量試劑盒
20. 即刻放進-70℃冰箱里保存
21. (選擇步驟)進行IOV組分純化(建議使用HEPENGBIO IOV膜性囊泡高質純化試劑盒