貨號：YX-W-A402                                                  規(guī)格：100管/96樣
黃嘌呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）試劑盒說明書
微量法
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
XOD（EC 1.17.3.2）催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子，是活性氧主要來源之一；同時(shí)也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動(dòng)物的心，肺，肝臟等組織中，當(dāng)肝功能受損時(shí)，XOD大量釋放到血清中，對肝損害的診斷具有特異性的意義。
測定原理：
XOD催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、
研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：30mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2 瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?br> 1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至290nm，蒸餾水調(diào)零。
2、XOD 檢測工作液的配制：用時(shí)在每瓶試劑二中加入15mL試劑一，充分混勻，待用；用不完的試劑 4℃可保存一周；
3、測定前將XOD檢測工作液在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和250μL工作液，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄290nm下初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算 ΔA＝A2-A1。
XOD 活性計(jì)算：
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）XOD 計(jì)算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=2131×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 XOD 計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr)÷T
=2131×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T
=2131×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每一萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/10⁴cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T
=4.26×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.6×10^-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×10⁴ L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）XOD 計(jì)算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=4262×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 XOD 計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr)÷T
=4262×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T
=4262×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每一萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/10⁴cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T
=8.52×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.6×10^-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×10⁴ L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：
反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。