抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate resistant acid phosphatase；TRAP）是一種在哺乳動物內(nèi)表達(dá)的糖化單體金屬蛋白酶，970 多堿基，320 多氨基酸，分子量為 35kD。作為破骨細(xì)胞的標(biāo)志，抗酒石酸酸性磷酸酶與破骨細(xì)胞調(diào)節(jié)的骨resorption 活性和骨生成代謝有關(guān)。抗酒石酸酸性磷酸酶是以酶原形式合成，通過蛋白酶裂解和還原后活化。在酸性環(huán)境下，催化磷酸酯鍵的水解，產(chǎn)生醇和釋放磷酸。其特征性為酒石酸抗性而與其它酸性磷酸酶區(qū)別?？咕剖崴嵝粤姿崦冈谄乒羌?xì)胞（osteoclast）、活化的巨噬細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞以及懷孕期的豬內(nèi)皮層子宮內(nèi)膜（endometrium）高度表達(dá)。在網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖（leukaemic reticuloendotheliosis）或毛細(xì)胞性白血?。?nbsp;hairy cell leukaemia）、戈謝?。?nbsp;Gaucher’s disease）、愛茲性腦?。?nbsp;HIV-induced encephalopathy）、骨巨細(xì)胞瘤（osteoclastoma）、骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis）和代謝性骨病等病人體內(nèi)抗酒石酸酸性磷酸酶顯著增高。基于底物萘酚 AS-MX 磷酸鹽（naphthol AS-MX phosphate），在酸性環(huán)境和酒石酸（tartrate）存在的條件下，酸性磷酸酶催化其水解，釋放出萘酚（naphthol-AS），進(jìn)而與重氮鹽耐曬紅紫（Fast red violet）偶聯(lián)，于是在酶的活動處形成不溶性紫紅色沉淀的偶氮染料，由此證明抗酒石酸酸性磷酸酶活性。其反應(yīng)體系為：
 產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO 清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO 固著液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO 反應(yīng)液（Reagent C） 微升
HEPENGBIO 染色液（Reagent D） 毫升
產(chǎn)品說明書 1 份
 
 

保存方式

 
 
保存 HEPENGBIO 反應(yīng)液（Reagent C）和HEPENGBIO 染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融， 避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保證 6 月
 

用戶自備

 
甲基綠復(fù)染試劑盒（HEPENGBIO40010）：用于常規(guī)染色后復(fù)染
1.5 毫升離心管：用于配制染色工作液的容器恒溫培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育
光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析
 

實驗步驟

 
 
實驗開始前，將試劑盒里的 HEPENGBIO 反應(yīng)液（Reagent C）和 HEPENGBIO 染色液（Reagent D）從－20℃ 的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化，并避光。然后移取 毫升 HEPENGBIO 染色液（Reagent D）到 1.5 毫升離心管，加入 微升 HEPENGBIO 反應(yīng)液（Reagent C），充分混勻后，標(biāo)記為 HEPENGBIO 染色工作液，室溫下，置入暗室。然后進(jìn)行下列操作：
 
 

操作一：細(xì)胞載玻片染色一、 樣本固著處理

 
1. 取出待測的細(xì)胞載玻片
2. 小心加上 微升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
3. 小心移去載玻片上的 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）
4. 小心加上 微升 HEPENGBIO 固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
5. 室溫下，孵育 2 分鐘
6. 小心移去載玻片上的 HEPENGBIO 固著液（Reagent B）
7. 小心加上 微升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），清洗樣品表面
8. 小心移去載玻片上的 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）
9. 重復(fù)實驗步驟 7 至 8 一次二、樣本染色處理
1. 小心加上 微升 HEPENGBIO 染色工作液，鋪滿整個載玻片樣品表面
2. 在 37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育 15 分鐘；或直至可見紫紅色（注意：避免光照）
3. 小心移去載玻片上的 HEPENGBIO 染色工作液
4. 室溫下，加上 微升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），清洗樣品表面
5. 小心移去載玻片上的 HEPENGBIO 清理液（Reagent A） 三、 樣本復(fù)染處理（選擇步驟）
1. 樣本復(fù)染處理（甲基綠）
2. 放上蓋玻片或封片
3. 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽性細(xì)胞呈現(xiàn)紫紅色，背景黃色，核為綠色
 
 

操作二：24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色一、樣本固著處理